细胞信号系统

产品分类

1. 非放射性EMSA的种类与相关产品

2. Viagene非放射性 EMSA产品信息

Viagene拥有多项关于EMSA的独特技术。非放射性EMSA及其相关产品是Viagene在全球推出的很成熟的产品之一。

EMSA产品特性

Viagene的EMSA成套试剂包括探针、转运膜、化学发光底物等所有试剂，到货后即可以进行EMSA测定。客户不需要花时间合成与标记探针或购买其它试剂。
Viagene出售的所有EMSA产品都经过测试，保证出结果。
Vaigene出售针对特异性TF的EMSA成套试剂的测定条件都经过优化。我们要求用户按照步骤操作，不要改变如何条件。用户不需要花时间自己摸索实验条件，出了问题也容易找原因。
Viagene自己制备有各种特定TF(如STAT1，STAT3，STAT5或NFkB）的阳性与阴性对照。我们因此有条件对特定TF进行实际EMSA测试。
由于每种产品都做过实验测定，测定条件也已经确定，用户不需要花时间自己摸索实验条件。
有中文与英文操作手册供用户选择。 EMSA产品目录

EMSA技术支持

尽管注意到了以上的问题，有时候还是没有拿到理想的结果。对于可能出现的问题，用户需要能够发现问题，找出解决办法。如何客户愿意找我们共同分析，我们也会提供力所能及的帮助。现在使用我们的产品与服务单位比较多。许多出现问题的用户，在我们的帮助下，都拿到了理想结果，许多并已经发表了文章。相信陆续会有更多文章发表。
我们能够回答有关EMSA实验的所有问题。欢迎来电与我们洽询。
我们的技术人员对EMSA非常熟悉，知道怎么分析结果，能够解决EMSA测定中的有关的问题。
如果你在北京或上海，我们的专家可以上门通过协助用户的实验。
我们提供EMSA技术服务以展示Viagene对所开发的EMSA技术的信心。

用户的反馈 EMSA产品目录

网上可以查到买其它公司的EMSA产品做不出结果的求助信息，但查不到用Viagene产品做不出结果的记录。
使用Viagene产品与服务的客户满意度为99％以上。

唯一一个不满意的用户是宁波大学的一位用户。用户本人到我公司看着做的实验，EMSA测定没有任何问题；在同一片胶上阳性与阴性对照非常清晰，整个胶片也非常漂亮。但在同一个图片上，客户提供的样品没有激活的NFkB。最后客户以我们的对照带比Western Blot的条带宽在网上发表信息，真叫人哭笑不得。
Viagene公司的客户很多，我们在此列出了一部分。欢迎客户来电了解更多情况。

已有20余篇文章发表

使用Viagene公司产品与服务的客户已经发表了20余篇文章。详情请点击这里。

3. 非放射性 EMSA试剂盒的成分

（01）生物素标记探针

（02）非标记竞争探针

（03） 10X反应液

（04） Poly (dI:dC).(dI:dC)

（05） Streptavidin-HRP

（06） 6X 上样液页首

一套试剂足够进行50次EMSA测定。 EMSA产品目录

　

4. 非放射性 EMSA的测定实例

4－1，非放射性NF-kB试剂盒[目录号：TFDET001]

NF-kB最初被鉴定为在B细胞中和免疫球蛋白k轻链的增强子结合。但随后在非B-细胞的细胞质中被发现，形成NF-kB和IkB的复合物。最初在DNA结合蛋白复合物中分离的NF-kB是由p65(RelA)和p50构成的异源双聚体。其他分离的单体包括p49（也可称为p52），p75(c-Rel),p68(RelB)。p65，p68，p75单体起反式激活作用。 p50，p49(p52)单体具有DNA结合活力，但只具有微量的反式激活作用。据报道p49和NF-kB的单体p65形成具有转录活力的异源双体，类似于p50/ p65异源双体。p49/ p65和p50/ p65异源双体在细胞质中受一种叫IkBa/MAD-3的抑制剂调节。IkB和p65单体结合，阻制了细胞核中的定位和DNA的结合。在体外高浓度的p65能形成同源双聚体，能和DNA微弱地结合。Poly(dI:dC)能抑制这一反应(14)。p49和p50也能形成同源双聚体，但在细胞中的浓度很低。

通常，在作NF-kB的凝胶迁移实验时，在20ul的反应体积中，有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles 的NF-kB9寡核苷酸(pH7.9), 50mMKCl, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油, 0.05%NP-40。当用纯化的蛋白时，250-300ng足以形成凝胶迁移复合物，而需用10ug的HeLa细胞核抽提物。凝胶迁移复合物在室温中保温30分钟，在50mMTris(pH8.3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离凝胶迁移复合物。含考马斯兰和二甲苯蓝色素的加样溶液只能加入到阴性对照反应中，因这两种色素会加剧NF-kB复合物的解离。当用HeLa细胞核抽提物作为结合蛋白来源时，可形成两种序列特异的凝胶迁移复合物，即p50/p50同源双聚体和p50/ p65异源双聚体。在表达p49，p50，p65的细胞中，可检测到4个序列特异的凝胶迁移复合物(p49/ p49，p50/ p50，p50/ p65，p49/ p65)，如果存在高浓度的p65，可检测到微量的p65/p65。下列试剂可加强NF-kB在体外的结合：mM级的GTP，ATP，精胺，亚精胺，钡或钙离子，ng级的Co³⁺(NH3)6。页首 EMSA产品目录

4－2，非放射性STAT5试剂盒[目录号：TFDET004]

STAT(Signal Transducer and Activator of Transcription)5 - 信号转导和转录激活因子5，属STAT蛋白家族，是一种tyrosine磷酸化转录因子，羧基端少数氨基酸序列不同。有STAT5A和STAT5B两种亚型，具有95％的同源性。

STAT5的活化与肿瘤的发生关系密切，有文献报道ALL（急性淋巴细胞白血病）、AML（急性髓细胞白血病）等白血病有JAKs，Stat1、3、5的活化，ALL以Stat5活化为主，在Stat5活化的AML病例中，有部分只有STAT5B活化而无Stat5A活化。另外，在各种人固体瘤和血液恶性瘤中，STAT蛋白（尤其是STAT3和STAT5）经常被过度活化。持续的STAT3和STAT5信号系统连续的反调控核基因的表达，促进了肿瘤细胞的生长和生存，常常导致恶性肿瘤的发生。因此，可将STAT蛋白家族做为肿瘤治疗的理想靶点，研究它们参与整个肿瘤细胞生长过程的调控机制，分析它们在细胞中的活化和抑制过程，为肿瘤的治疗提供新思路。EMSA产品目录

STAT5在细胞中的信号转导主要通过JAK（JAK酪氨酸蛋白激酶）/STATs信号途径完成，STAT5通常位于胞浆中。当细胞因子与相应受体结合，激活与受体相联的JAK激酶磷酸化（免疫沉淀法实验证实在用GM-CSF处理后仅JAK2的酪氨酸被磷酸化）。磷酸化的JAK激酶使STAT5单体磷酸化，被磷酸化的STAT5单体与受体分离并与已经活化的其他STATs蛋白形成同源或异源二聚体，二聚体转移到细胞核与相应的DNA结合并激活转录。从激活酶动力学角度讲，STAT5被细胞因子激活后用STAT5抗体可检测到2个条带，上方一条是与细胞因子刺激无关的组成性酪氨酸磷酸化，下面一条被激活的是STAT5B，在1 min内被磷酸化，并随蛋白质的磷酸化的不同而迁移。有实验表明STAT5A比STAT5B更易于激活。

参考资料：

Imada K,Leonard W J.The JAK-STAT pathway〔Ｊ〕.Mol Immunol, 2000, 37:1-11
Magrassi L,De Fraja C,Conti L,et al.Expression of the JAK and STAT superfamilies in human meningiomas〔Ｊ〕.J Neurosurg, 1999,91:440-446.

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