市场上现有的制作多拷贝的商品成套试剂是对游离DNA分子进行操作,不同来源的DNA片段的重组装配为随机的非定向连接。由于无法阻止载体分子以及目标DNA分子的自身连接。制作DNA多重拷贝程序繁杂、效果差,成功可能性小于5%。
现有制作多拷贝的每次循环均需进行以下基因克隆与扩增操作;内切酶处理样品→电泳分离DNA→从凝胶中提取DNA→酶连接→转化细菌→克隆选择及扩增→纯化质粒→内切酶消化→电泳鉴定→扩增阳性克隆→纯化质粒→内切酶消化→电泳鉴定。需时6-7天。
经过专门设计的基因载体有可以固定于试管壁的构造,使分离目标片断以及与载体的重组连接非常容易。新载体有可以制作多重拷贝的结构并且有使DNA重组只能在载体分子与目标DNA之间发生,不能产生自连接的机制。载体的抗抗菌素筛选标记适用于所有原核与真核细胞系统。通过让单个载体运载多个相同或不同的核酸片断或基因表达组合进入细菌、细胞,能够明显提高受体细胞内的DNA分子的产量、促进基因表达或提高基因抑制水平。
新方法操作简单,节省时间, 成功率高。运用新载体技术制作多拷贝可以节省十倍以上时间。
相比之下,新的制作方法只能产生一种正确的连接形式。载体或分子的自连接不能够形成,因而获得阳性克隆的概率为100%。